猪流感Elisa试剂盒（96T）

本试剂盒是利用间接Elisa的方法检测猪血清的猪流感病毒抗体。
引言：
尽管猪流感总被认为多见于怀孕母猪（能引起生殖失调），但幼猪更易检测出猪流感病毒。猪流感可以引起重大的经济损失，损失和死亡率没有直接关系（相关性小于1%）而是影响产肉率。Elisa方法可以快速检测抗猪流感病毒A抗体，在养殖地区可以有助于病理学诊断和疫苗注射的判断。
原理：
此试剂盒是利用间接酶联免疫检测的原理制成的，96孔微孔板上包被有特异性抗原，测试孔中的样品经过培养后，流感病毒抗体与预先包被的抗原特异性结合并在清洗过程中保留在小孔中，然后加入孔中的酶标记物与猪抗体结合，未结合的酶标记物在接下来的清洗过程中被冲洗掉，然后加入底物，孔中液体的颜色与抗体量成正比。
试剂盒组成：
包被有特异性猪流感抗原的96孔微孔板8×12 ，2
0号瓶：洗液（20×）
50ml
1号瓶：样品稀释液（3×）
50ml
2号瓶：辣根过氧化物酶标记物15ml
3号瓶：底物：含ABTS 15ml
4号瓶：反应终止液：含草酸15ml
5号瓶：流感阳性对照1ml

需要的设备以及试剂（盒中未提供）：
37度恒温箱，
精密可调单道/多道移液器带有吸头
样品稀释用试管或稀释盘
酶标仪（405nm）
蒸馏水,
洗板装置

使用注意事项:
1．仔细阅读使用说明。
2．储存试剂盒在4℃下,不能冷冻.
3．保护微孔板的干燥剂潮湿则不能使用，不使用的板子应与干燥剂一起封口存放。
4．尽管在制造过程中抗原被化学灭活,但是抗原标记板是一个流感潜在来源。
5．不能暴露底物在强光或氧化剂下,ABTS底物对于污染物非常敏感,因此一次倒出后不能再倒回瓶子,瓶中的量超过实际量的25%用于备用.
6．不要用过期以及不同批号的试剂盒。
7．全程需用的微量移液器、洗板装置要保持精密性和准确性。
8．不要用口移液，在整个过程中要带手套。终止液是有机酸,具有毒性,腐蚀性,要小心操作。
9．所有的废物在丢弃之前必须完全净化.试剂盒仅限兽用
样品准备:
1.阳性和阴性对照备用,不需稀释.
.血清样品必须用配好的稀释液稀释为1:200,我们建议用两步稀释法。
例如：首先将10ul样品加入390ul配好的样品稀释液，然后移10ul这种1:40样品到已有40ul样品稀释液的微孔中。
如果应用的是可以精确移取5ul液体的球型移液器或者可调多道移液器，那么两步法可以如下操作：
首先在稀释盘中将5ul样品加入95ul配好的样品稀释液中，然后移5ul这种1：20的稀释样品到已有45ul样品稀释液的微孔中。
试剂准备:
1.所有试剂在使用前必须升至室温.
2.由于高浓度的盐清洗液及样品稀释液容易形成结晶,
3.晶体应该在37℃度水浴下重新溶解。
4.冲洗液（20×）（0号瓶）：用蒸馏水按20倍稀释（例如：要准备200ml冲洗液，要用10ml 冲洗液加入190ml蒸馏水混合）,推荐洗液在7日内用完.
5.样品稀释液（3×）（1号瓶）：用蒸馏水按3倍稀释（例如，要准备60ml稀释液，要用20ml稀释液加入40ml蒸馏水混合），推荐洗液在7日内用完。
实验操作步骤：
1.所有试剂升至室温，确保实验连续性。
2.记录样品和对照位置在12×8模板纸上，阳性和阴性对照必须和微孔板上保持一致。
3.去掉板上的覆盖膜，加50ul对照和1：200稀释样品到相应的孔中。
4.用覆盖膜封上扳子，在37度下孵育1小时。
5.去掉覆盖膜并用洗液洗板3次（300ul每孔），最后用力在吸水纸上将板子拍干。
6.加50ul酶标记物（2号瓶）到每个孔中。
7.用覆盖膜封上板子，在37度下孵育1小时。
8.去掉覆盖膜并用洗液洗板3次（300ul每孔），最后用力在吸水纸上将板拍干。
9.加50ul底物（3号瓶）到每个孔中，轻拍板子。
10.用覆盖膜封上板子，在20-25℃避光环境下孵育15分钟。
11.去掉覆盖膜加50ul终止液（4号瓶），轻拍微孔板。
12.用柔纸擦去微孔板底面的尘埃，用酶标仪在405nm读取微孔板，记录结果。
实验确认：
实验符合要求的条件：阳性对照的吸光度值大于0.8并且阳性对照的吸光度值大于或等于4倍的阴性吸光度值。
结果计算与判断：
通过IRPC值（相关指标×100%）计算结果，公式如下：
样品吸光度值－阴性对照吸光度值
IRPC = ----------------------------- ×100%
阳性对照吸光度值－阴性对照吸光度值

样品 IRPC 值
阳性 > 20
阴性 ? 20